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豬胰島素(INS)酶聯(lián)免疫試劑盒

數(shù)量(盒) 價格
500 1800.00元/盒
  • 最小起訂: 1盒
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  • 發(fā)布日期:2020-12-16
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上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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詳細(xì)參數(shù)
品牌恒遠(yuǎn)生物型號HB055-Pg
加工定制

產(chǎn)品詳情

豬胰島素(INS)ELISA試劑盒

使用手冊

 

產(chǎn)品編號:HB055-Pg

 

使用前請仔細(xì)閱讀本手冊。如果有任何問題,請聯(lián)系我們,我們會給你提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù)。

 

【產(chǎn)品名稱】

中文名稱:豬胰島素(INS)酶聯(lián)免疫試劑盒

 

【包裝規(guī)格】

96T/盒

 

【預(yù)期用途】

僅供科研使用,定量檢測血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等相關(guān)樣本中豬胰島素(INS)的濃度。

 

【檢測原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中豬胰島素(INS)水平。用純化的豬胰島素(INS)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入豬胰島素(INS),再與HRP標(biāo)記的豬胰島素(INS)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬胰島素(INS)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中豬胰島素(INS)濃度。

 

 

 

 

【產(chǎn)品性能】

1、物理性能

試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝,無破損漏氣(如有漏氣,不影響使用)。

2、劑量反應(yīng)曲線線性

標(biāo)準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)r值,大于等于0.9900。

3、檢測范圍

3 mIU/L- 80 mIU/L 。

4、靈敏度

最低檢出劑量小于0.75 mIU/L。

5、精密度

精密度用樣品測定值的變異系數(shù)CV 表示。CV(%) = SD/mean×100

批內(nèi)差:取同批次試劑盒對低、中、高值定值樣本進(jìn)行定量檢測,每份樣本連續(xù)測定20 次,分別計算不同濃度樣本的平均值及SD 值。

批間差:選取3 個不同批次的試劑盒分別對低、中、高值定值樣本進(jìn)行定量測定,每個樣本使用同一試劑盒重復(fù)測定10 次,分別計算不同濃度樣本的平均值及SD 值。

批內(nèi)差: CV<5.2%

批間差: CV<8.6%

6、回收率

分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白,做回收實驗,得出回收率范圍和平均回收率。

Sample Type

Range (%)

Average Recovery (%)

Tissue Lysates (n=5)

93-102

98

Serum (n=5)

91-105

99

EDTA plasma (n=5)

90-109

102

Cell culture media (n=5)

87-110

101

 

 

7、線性

分別往5個樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白,做回收實驗,得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍,4倍,8倍,16倍做回收實驗,得出回收率范圍及平均回收率。

Sample

1:2

14

1:8

1:16

Tissue Lysates (n=5)

92-105%

84-95%

90-102%

80-93%

Serum (n=5)

81-103%

89-99%

86-98%

83-101%

EDTA plasma (n=5)

85-97%

82-101%

83-96%

79-91%

Cell culture media (n=5)

83-105%

89-112%

81-106%

82-110%

8、特異性

本試劑盒識別天然和重組豬胰島素(INS),經(jīng)檢測與其它相似物質(zhì)無明顯交叉反應(yīng)。由于受到技術(shù)及樣本來源的限制,不可能完成所有相關(guān)或相似物質(zhì)交叉反應(yīng)檢測,因此本試劑盒有可能與未經(jīng)檢測的其它物質(zhì)有交叉反應(yīng)。

9、穩(wěn)定性

經(jīng)測定,試劑盒在有效期內(nèi)務(wù)必按推薦溫度保存,活性降低率小于5%。為減小外部因素對試劑盒破壞前后檢測值的影響,實驗室的環(huán)境條件需盡量保持一致,尤其是實驗室內(nèi)溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實驗員來進(jìn)行操作可減少人為誤差。

 

【試劑盒組成】

序號

中文名稱

英文名稱

規(guī)格

1

30倍濃縮洗滌液

Wash solution(30X)

20ml×1

2

酶標(biāo)試劑

HRP-Conjugate reagent

6ml×1

3

酶標(biāo)包被板

Microelisa stripplate

12×8

4

樣品稀釋液

Sample diluent

6ml×1

5

顯色劑A

Chromogen Solution A

6ml×1

6

顯色劑B

Chromogen Solution B

6ml×1/

7

終止液

Stop solution

6ml×1

8

標(biāo)準(zhǔn)品160mIU/L

Standard

0.5ml×1

9

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

Standard diluent

1.5ml×1

10

說明書

Product Debion

1

11

封板膜

Sealing plate membrane

2張  

12

密封袋

Sealing bag

1

注意:使用前請檢查試劑盒中試劑的標(biāo)簽和數(shù)量與表格是否一致。

需要但未提供的材料及耗材

  1、酶標(biāo)儀(建議儀器使用前提前預(yù)熱)

2、精密移液器、吸頭、加樣槽

3、蒸餾水或去離子水

4、洗瓶或者自動洗板機(jī)

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、EP管

7、無粉一次性乳膠手套

 

【儲存條件及有效期】

  1、2-8℃保存,切勿冷凍,有效期6個月。

  2、開封使用后,包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中,密閉自封袋,并將全部試劑放回2-8℃冰箱。

注意試劑盒內(nèi)酶標(biāo)條可拆卸,按實驗需求可分多次使用;使用后的剩余試劑盒建議在首次實驗后1 個月內(nèi)使用完畢。產(chǎn)品過期時間以盒子上的標(biāo)簽為準(zhǔn),保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的。

 

【適用儀器】

  半自動的酶標(biāo)儀,如Thermo MK3,或者國產(chǎn)酶標(biāo)儀。

 

【樣本要求】

1.樣本類型和采集

血清將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置0.5-2小時或4過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
    血漿EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mLPBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

細(xì)胞裂解液: 吸棄培養(yǎng)液,用PBS(0.01 M,pH 7.4)將細(xì)胞洗一遍。用細(xì)胞刮刮下細(xì)胞(不能用胰酶和EDTA 處理),加入2-5 mL PBS(0.01 M,pH 7.4)。懸浮細(xì)胞可省略。收集細(xì)胞懸液,4℃ 1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷的PBS潤洗3次。加入適量的預(yù)冷PBS或非變性細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞,通常6孔板一個孔的細(xì)胞量需要150-250μL PBS重懸。 將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復(fù)凍融3次,使細(xì)胞充分裂解,也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,以達(dá)到裂解的目的。4℃ 10000×g 離心10min,除去細(xì)胞碎片,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2.樣本保存和穩(wěn)定性

樣本在2-8℃條件下,可以儲存72h,在- 20℃或-80℃可以儲存6個月及以上。樣本收集后,不是一次檢測完,請按一次用量分裝凍存,避免反復(fù)凍融。

 

 

 

 

【操作步驟】

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

80mIU/L

5號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

40mIU/L

4號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

20mIU/L

3號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10mIU/L

2號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

5mIU/L

1號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

8. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10-20分鐘。

10.終止:每孔加終止50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

注意:

1. 試劑準(zhǔn)備:試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用。準(zhǔn)備一次實驗所需要的酶標(biāo)條,其它的可從微孔板上拆下,密封,按照說明書要求保存,以備下次使用。

2. 加樣:實驗操作中請使用一次性的滅菌吸頭,避免污染。加樣時注意不要有氣泡產(chǎn)生,將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。與反應(yīng)試劑加入一樣,加樣過程中第一個孔與最后一個孔加樣時間間隔盡量?。ㄒ话憧刂圃?/span>10 分鐘以內(nèi)),如果太大,將會導(dǎo)致不同的“預(yù)溫育”時間,從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。為了測值的準(zhǔn)確性,推薦設(shè)置復(fù)孔進(jìn)行實驗。

3. 溫育:為防止樣品蒸發(fā),實驗時請將加上蓋或覆膜的酶標(biāo)板置于濕盒內(nèi),以避免液體蒸發(fā),洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài),同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的溫育時間和溫度。

4. 洗滌:濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。充分洗滌非常重要,在每次洗滌過程中,都要將洗滌液完全甩干。洗滌過程中反應(yīng)孔內(nèi)殘留的洗滌液應(yīng)在吸水紙上拍干,勿將吸水紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,同時要輕輕擦除板底殘留的液體和手指印,避免影響最后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。如果使用自動洗板機(jī),請在熟練使用后再用于正式實驗過程中。

5. 反應(yīng)時間的控制:加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化,如觀察到顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),避免反應(yīng)過強(qiáng)而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。

6. 底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。

【操作程序總結(jié)】

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

【注意事項】

1. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

 

2. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

 

3. 為免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。

 

4. 要嚴(yán)格避免操作過程中酶標(biāo)板干燥。干燥會使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活。  

 

5. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

 

6. 顯色時間供參考,因用戶實驗室條件差異,最佳顯色時間會有所不同。

 

7. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

 

8. 本試劑不同批號組分不得混用。

 

9. 揭封板膜和覆蓋封板膜時應(yīng)避免用力過大導(dǎo)致液體濺出。

 


【結(jié)果計算】

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。


【常見問題及解決方法

若實驗效果不好,請及時對顯色結(jié)果拍照,保存實驗數(shù)據(jù),保留所用板條及未使用試劑,然后 聯(lián)系我公司技術(shù)支持為您解決問題。同時您也可以參考以下資料:

常見問題

可能原因

解決方法

 

 

標(biāo)準(zhǔn)曲線梯度差

吸液或加液不準(zhǔn)

檢查移液器及吸頭

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋不正確

稀釋標(biāo)準(zhǔn)品時稍微旋轉(zhuǎn)瓶身

洗滌不完全

保證洗滌時間和洗滌次數(shù)及每孔的加液量

 

 

 

 

顯色很弱或無色

孵育時間太短

保證充足的孵育時間

實驗溫度不正確

使用推薦的實驗溫度

試劑體積不夠或漏加

檢查吸液及加液過程,保證所有試劑按順序足量添加

稀釋不正確

酶標(biāo)記物失活或底物失效

混合酶結(jié)合物和底物,通過迅速顯色來檢查判斷

讀數(shù)數(shù)值低

酶標(biāo)儀設(shè)置不正確

在酶標(biāo)儀上檢查波長及濾光片設(shè)置

提前打開酶標(biāo)儀預(yù)熱

變異系數(shù)大

加液不正確

檢查加液情況

 

 

背景值高

 

酶標(biāo)板洗滌不完全

保證每步清洗完全;如果用自動洗板機(jī),請檢查所有的出口是否有堵塞;是否使用試劑盒配備的洗滌液

洗液有污染

配制新鮮的洗液

靈敏度低

試劑盒保存不當(dāng)

按說明書要求保存相關(guān)試劑

 

邊緣效應(yīng)

 

孵育溫度不均衡

孵育時每步均使用新的封板膠紙,避免在環(huán)境溫度變化大的地方孵育,勿疊放反應(yīng)板

 


 

【文獻(xiàn)精選

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